Instrumento de análise de fragmentos

Para extrair uma mistura de fragmentos de DNA, coloque através de um instrumento de PCR para fazer uma purificação simples. Remova o nucleotídeo único fluorescente DDNTP livre, deixando um fragmento de DNA de um certo comprimento, que pode ser sequenciado na máquina. Uma solução de poliacrilamida é injetada primeiro em um capilar oco durante o processo de sequenciamento. Então, a solução de poliacrilamida foi ionizada pela irradiação da luz UV para gerar uma reação de polimerização. O gel de poliacrilamida produz um efeito de separação sob o campo elétrico para iniciar a eletroforese do nucleotídeo. O movimento eletroforético de fragmentos de DNA curto é rápido e o movimento eletroforético de fragmentos de DNA longo é lento. A mistura de fragmentos de DNA se move de uma carga negativa para uma carga positiva sob a ação de um campo elétrico em um capilar contendo um gel de poliacrilamida. A extremidade positiva do capilar é irradiada com um laser de estado sólido, e um sensor óptico espectroscópico registra as diferentes intensidades de fluorescência. Cada fragmento de DNA, ao passar pelo ponto de varredura a laser, possui um grupo fluorescente, que emitirá uma cor fluorescente específica.

Porque no processo anterior de reação de polimerização, o ponto de partida da reação de polimerização começa a partir de uma posição específica do iniciador. Portanto, o fragmento de DNA que atinge o ponto de varredura a laser da eletroforese primeiro é o fragmento mais curto; portanto, sua posição de terminação de polimerização estará mais próxima da posição inicial da polimerização. Portanto, a cor fluorescente reflete qual das bases na extremidade 3 'é A, T, C e G.

Por outro lado, quanto mais lenta a eletroforese dos fragmentos de DNA atinge o ponto de varredura a laser, mais os fragmentos de DNA. Como resultado, seu local de rescisão está mais distante da posição inicial do primer. Finalmente, é obtido um mapa de quatro cores.